全稱為:羥丙基葡聚糖凝膠。常用商品凝膠的一種(另一種為交聯(lián)葡聚糖凝膠Sephadex G)。Sephadex LH-20為Sephadex G-25(葡聚糖凝膠按交聯(lián)度分類的其中一種商品型號)經(jīng)羥丙基化處理后得到的產(chǎn)物,此時,葡聚糖凝膠分子中的葡萄糖部分將與羥丙基結(jié)合成下列醚鍵形式: -OH → -OCH2CH2CH2OH
與Sephadex G比較,Sephadex LH-20分子中 -OH 基總數(shù)雖無改變,但碳原子數(shù)所占比例卻相對增加了,所以Sephadex LH-20不僅可在水中應(yīng)用,也可在極性有機(jī)溶劑或他們與水組成的混合溶劑中膨潤使用。
Sephadex LH20是一種價錢較高的填料,特點(diǎn): 1、適合用有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子,可以非常經(jīng)濟(jì)地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物 2、結(jié)合凝膠過濾、分配色譜及吸附性層析于一身,分離結(jié)構(gòu)非常相近的分子 3、載量可高達(dá)300mg樣品/ml凝膠,極少需要再生,分離效果可保持十幾年不變。
原理:
Sephadex LH-20的分離原理是根據(jù)分子大小,主要有兩方面:以凝膠過濾作用為主,兼具反相分配的作用(在反相溶劑中)。因?yàn)槟z過濾作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脫下來,小分子的化合物保留強(qiáng),最后出柱。如果使用反相溶劑洗脫, Sephadex LH20對化合物還起反相分配的作用,所以極性大的化合物保留弱,先被洗脫下來,極性小的化合物保留強(qiáng),后出柱。如果使用正相溶劑洗脫,這主要靠凝膠過濾作用來分離。
洗脫溶劑:
Sephadex LH-20 洗脫溶劑因分為兩類:反相和正相兩種。用得最多的是反相溶劑洗脫,以氯仿/甲醇溶解,過濾后,濕法上樣。